尊龙凯时细胞培养攻略：293T细胞的基本信息与操作指南

一、细胞基本信息

细胞名称：人胚肾细胞

细胞别名：Hek293T; HEK-293T; HEK293T; HEK-293-T; 293-T; 293T; Human Embryonic Kidney 293T; 293tsA1609neo

种属来源：人

组织来源：肾

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养体系：MEM+10%FBS+1%P/S

传代比例：1:2~1:4，每2-3天更换培养液

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳，温度：37℃

冻存条件：冻存液：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO；存储条件：液氮

安全性：建议在二级生物安全柜内操作，并做好个人防护。

二、复苏及传代方法

1. 细胞株的复苏（冻存管）

1. 将冻存管在37℃的水浴中迅速完全融化，并适当轻轻摇动以促融，快速融化可提高细胞复苏效果。

2. 打开冻存管之前，用75%酒精擦拭管外壁。

3. 将完全融化的细胞直接离心或转移至无菌的15ml离心管中，400g离心5分钟，并小心吸除上清，注意不要吸掉细胞沉淀。然后用新鲜完全培养液重悬，转移至培养器皿中并混匀，置于CO2培养箱37℃培养。

4. 次日根据细胞的贴壁或生长情况更换培养液。注意：如果冻存管不能及时复苏，应存放在-80℃或液氮中，并尽快进行复苏培养。

2. 细胞株的复苏（T25瓶）

1. 收到的T25瓶脱外包装后，先用75%酒精擦拭瓶外壁。

2. 在倒置显微镜下观察细胞状态，确保无异常；无异常后，将多余的培养液用移液器移去，置于CO2培养箱37℃培养过夜。

3. 次日观察贴壁或生长状态，决定是否换液或传代，参考传代比例1:2~1:4。

三、注意事项

1. 每支冻存管约含1×10^6个细胞，体积为1ml，预期存活率为60-90%。建议复苏至一个T25瓶或一个6cm培养皿。如果复苏后的存活率较低，可以消化后转移至35cm培养皿/T125瓶中，这样细胞的生长会更好。

2. 如果细胞为常温运输且培养瓶内充满完全培养液的贴壁细胞，收到后应及时记录有无漏液或瓶身破损现象。用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态，静置于细胞培养箱中培养2-4小时后，再进行检查。

3. 若细胞密度超过85%，请尽快进行传代操作。如果悬浮细胞较多，请将培养瓶静置过夜，使悬浮细胞重新贴壁。若收到常温运输的离心管装悬浮细胞，可直接转移至培养皿或培养瓶，若培养液颜色正常，则继续培养，并在首次更换培养液时保留一半原培养液，加入一半新鲜培养液，以避免因培养液或血清差异导致细胞生长不适应，确保细胞良好的生长状态。

4. 细胞培养操作应在生物安全柜内进行，并严格遵守无菌操作。